Estratégia abrangente para cromatografia líquida de alta eficiência: dos princípios às precauções operacionais

Cromatografia líquida de alto desempenho

A cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC) é uma técnica analítica que utiliza líquido como fase móvel. Ele bombeia um único solvente ou solvente misto, tampão e outras fases móveis através de um sistema de infusão de alta pressão para uma coluna cromatográfica, que contém uma fase estacionária. Dentro da coluna cromatográfica, os componentes da amostra são efetivamente separados devido às diferentes forças de interação com a fase estacionária e a fase móvel. Posteriormente, esses componentes separados entram no detector para análise detalhada, conseguindo assim uma análise abrangente da amostra.

O princípio baseia-se na diferença na relação de distribuição da mistura entre líquido-sólido ou dois líquidos imiscíveis. Este método é particularmente adequado para a análise de substâncias com pontos de ebulição elevados, difíceis de vaporizar, termicamente instáveis ​​e biologicamente ativas. Ao mesmo tempo, a cromatografia líquida de alta eficiência também tem se mostrado amplamente utilizada na análise quiral, fornecendo importante suporte técnico para pesquisas nas áreas de química, biologia e medicina.

Etapas operacionais da cromatografia líquida de alto desempenho

Iniciando o equipamento: Primeiro, ligue os interruptores do computador e do cromatógrafo para iniciar o instrumento.

Faça login na estação de trabalho: Faça login na estação de trabalho de cromatografia líquida para se preparar para operações subsequentes.

Configuração e definição de parâmetros: Após selecionar a configuração do instrumento, faça as configurações de parâmetros necessárias, como relação de fase móvel, sensibilidade do detector, etc.

Autoteste do instrumento e estabelecimento do método: Inicie o autoteste do instrumento para garantir que o instrumento esteja em boas condições. Depois de passar no autoteste, estabeleça métodos correspondentes com base nos requisitos experimentais.

Equilíbrio do sistema: Antes de iniciar a coleta de dados, certifique-se de que o sistema esteja funcionando sob condições definidas por um período de tempo para atingir um estado equilibrado.

Coleta de dados: Quando a linha de base estiver estável, realize a injeção manual. Clique no ícone Iniciar na interface de coleta de dados para iniciar a coleta de dados. Após a coleta, salve o arquivo de cromatografia.

Análise de dados e saída de relatório: Selecione a função de análise de dados na interface principal e abra o arquivo de cromatografia para processamento e análise. Após a conclusão da análise, o relatório é gerado e o teste é finalizado.

Desligamento e limpeza: Antes de desligar, deixe a máquina funcionar por tempo suficiente e lave totalmente a coluna com fase móvel para garantir que não haja resíduos antes de desligar a máquina.

Precauções para usar cromatografia líquida

Operação segura: Evite sempre o contato direto das mãos com a agulha e áreas que possam entrar em contato com a amostra para garantir a segurança pessoal e a limpeza do instrumento.

Operação de lavagem da agulha: Antes de aspirar uma amostra, a agulha deve ser cuidadosamente lavada com etanol ou metanol para remover possíveis impurezas ou resíduos.

Eliminar bolhas de ar: Durante o processo de amostragem da seringa, certifique-se de que não há bolhas de ar misturadas. As bolhas de ar podem ser eliminadas apontando a agulha para cima e sacudindo o tubo da agulha enquanto mantém a velocidade de sucção apropriada.

Velocidade e profundidade de inserção: A inserção deve ser rápida e estável para garantir que a velocidade e a profundidade de cada injeção de amostra permaneçam consistentes, o que é a chave para garantir a precisão dos resultados da análise.

Injeção de amostra: Quando a ponta da agulha é inserida na câmara de vaporização até o meio, a injeção da amostra deve ser iniciada para garantir que a amostra possa ser totalmente vaporizada e analisada de forma eficaz.

Verifique se há vazamento de ar: Se for constatado que a pressão da câmara de gaseificação cai, o formato do pico fica menor ou a largura fica maior, isso pode ser causado por vazamento de ar. Neste momento, o anel de vedação deve ser substituído a tempo de restaurar a operação normal do instrumento.

Classificação das agulhas de injeção: As agulhas de injeção dos cromatógrafos gasosos e líquidos não podem ser misturadas. Os cromatógrafos gasosos usam agulhas pontiagudas, enquanto os cromatógrafos líquidos usam agulhas planas. A mistura pode causar danos ao instrumento ou resultados analíticos imprecisos.

Estabilidade dos parâmetros: Durante o processo de teste, a estabilidade dos parâmetros do instrumento deve ser mantida e os parâmetros devem ser evitados à vontade para garantir a precisão dos resultados da análise.

Segurança de dados: Não use sua própria unidade flash USB para copiar dados para garantir a segurança e integridade dos dados.